靈芝多糖的常規提取方法已有報道，這些方法不僅費時，而且收率很低。目前，超聲（shēng）技術已廣泛應用於中（zhōng）藥有（yǒu）效成分的提取，作者采用該方法（fǎ）提取靈芝多糖，不僅大幅度提高了有效成分的提取率，節省溶劑，簡化提取步驟，而且避免了高溫對有效成分的破壞。為探討靈芝多糖超聲法好的提取條件，采用正交設計對其提取工藝進行了試驗研究。

1　儀器與材料

　　超（chāo）聲波提取罐JP600G（武漢嘉鵬電子有限公司）；雙光束紫外可見分光光度計760 CRT（上海光學儀器廠）；高速（sù）中藥粉碎機HX-200型（浙（zhè）江省（shěng）永康市溪岸五金（jīn）藥具廠）；旋轉蒸發儀RE-52 A （上海亞榮（róng）生化儀器廠）；恒溫水浴鍋；索氏提取器；高（gāo）速離心機。

　　靈芝由國家科技部（bù）泰山赤（chì）靈芝GAP種植基地提供，經山東中醫藥大學徐淩川副教授鑒定為Gan- o&mla lucidum Kalst；新（xīn）配0.2%蔥酮醋酸乙（yǐ）酯試劑，無水葡萄糖對照品（pǐn）（105℃幹（gàn）燥（zào）恒重）及（jí）其他（tā）分析純試劑。

2　方法與結果

2.1　靈芝多糖的提取與精製

　　稱（chēng）取靈（líng）芝粉末30g,乙醚480mL回流脫脂2 次，每次1h;再用甲（jiǎ）醇480mL回流提取2次，每（měi）次1 h。藥渣加水360mL,沸水浴提取2次（cì），每次1.5h，合並2次提取液，高速離心機2400r·min-1，離心20 min。減壓濃縮至350mL，活性炭脫色，過濾，濾液加乙醇使其含醇量達百分之八十，放置過夜，抽（chōu）濾，沉澱以 200 mL水溶解重（chóng）複醇沉1次。沉澱分別以無（wú）水乙醇、丙酮、乙醚多次洗滌，60℃幹燥，即得靈芝多糖。

2.2 標（biāo）準曲線的製備

2.2.1 0.1%葡萄糖標準液的配製（zhì） 精密（mì）稱取幹燥至恒重的無水葡萄糖0.1g,配成100mL溶液，即得 0.1％葡萄糖標準液。

2.2.2 0.2%蒽酮-醋酸乙（yǐ）酯顯色劑的配（pèi）製　精密稱取0.4g蒽酮，溶於200mL醋酸乙酯，搖勻，置（zhì）於棕色瓶中保（bǎo）存。

2.2.3　多糖吸收波長的測定（dìng）　精密吸取0.1% 葡萄（táo）糖標準液1.0mL，用蒸餾水定容至50mL，取1 mL放於幹燥的10mL具塞試管中，再加入4mL濃 H2SO4，搖勻，5min後加1mL 0.2%蒽酮-醋（cù）酸乙酯（zhǐ）， 100℃水浴加熱10min取出，放至室溫。掃描條（tiáo）件：狹縫2.00nm，采樣間隔1.00nm，在（zài）500～700nm進行慢速掃描。測得靈芝多糖的吸收波長可達618 nm，吸光度（dù）為0.116，透過率為76.6%。

2.2.4 標準（zhǔn）曲線（xiàn）的繪製 分別精密吸取0.1%葡萄糖標準液（yè）1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，用蒸餾水分別定（dìng）容至50mL，分別取1mL加入（rù）幹燥的6支 10mL具塞試管中，並編號（hào），再（zài）分別加入4mL濃（nóng）硫酸，搖勻，5min後加1mL 0.2%蒽酮-醋酸乙酯，100 ℃水（shuǐ）浴10min取出，放至室溫。取1mL蒸（zhēng）餾水，以濃硫酸為空白（bái）對照，618nm測吸光度。以吸（xī）光度為（wéi）縱坐（zuò）標，無（wú）水葡萄糖含量為橫坐標製標準曲（qǔ）線，回歸方程為A＝0.006 6×C-0.0739，r=0.9992，表明 20～120μg·mL-1線性關係良好。

2.3 換算因素的（de）測定

　　精密稱取靈芝多糖（táng）18.00mg,置（zhì）100mL量瓶中，蒸（zhēng）餾水溶解並定容至刻度，取2mL用蒸餾水定容至10mL，得多糖供試液。精密吸取1mL，按標準曲線項下的方法測定吸光度，計算出多糖溶（róng）液中葡萄糖的含量（liàng），並計（jì）算出換算因子f =W/CD。式中 W為多糖量（μg），C為多糖溶液中葡萄糖的含量，D 為靈芝多糖的（de）稀釋因素。測得f=1.7948.

2.4 正交試驗設計

　　以溫度、料液（yè）比（藥材：水）、提取時間為（wéi）因素，設計（jì）3因素,3水平的L9（34）試驗，見表1。

表1　因素及水平

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A B C

水平　 溫度　 時間　 藥材:水

/℃ /min

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1 40 20 1:10

2 50 40 1:20

3 60 60 1:30

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2.5 正交試驗結果

　　精取靈芝3g,按正（zhèng）交試驗表（biǎo）所列條件，超（chāo）聲提取2次，過濾，合並提取液，濃縮並定容（róng）至100mL。精密吸取0.15mL，加水0.85mL，按標準曲線項下的方法測定吸（xī）光度，計算出供試液中（zhōng）葡萄糖的含量，並計算多糖含量(％)=CDF/W×100。式中C為供試液中葡萄糖的濃度（μg·mL-1），D為供試（shì）品溶液的（de）稀釋因子,f為換算因子，W為供試品重量（μg）。試驗結果見表2，方差（chà）分（fèn）析見（jiàn）表3。

表2 試驗結果（guǒ）

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No. 多糖含量（liàng）/％

1 2.3953

2 2.6443

3 2.9177

4 3.1435

5 2.5129

6 3.2448

7 2.4773

8 2.5679

9 2.3584

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表3 方差分（fèn）析結果

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方差來源 離均（jun1）差平方和 自（zì）由度 均方（fāng） F P

A 0.3823 2 0.1911 1.097 ＞0.05

B 0.1081 2 0.0540 0.310 ＞0.05

C 0.3484 2 0.1742 0.048 ＞0.05

誤差（chà） 0.0168 2 0.0083

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注：F0.05(2，2)＝19.00

　　以多糖含量百分數為考察指標，各因素作用主次為A＞B＞C。方差（chà）分析表明，A，B，C3因素對結果（guǒ）均無顯（xiǎn）著性影響，故依據直觀分析（xī）結果，結合生（shēng）產成本，選擇靈芝多糖的好（hǎo）的提取工藝為 A2B1C1，即10倍量水50℃超聲提取2次，每次20min。

2.6　多糖含量測定

2.6.1　常規方法　精取靈芝粉末（mò）5g,乙醚100mL 回流脫脂2次，每次1h;再用甲醇100mL回流提取 2次，每（měi）次1h。藥（yào）渣加水（shuǐ）80mL,沸（fèi）水浴提取2次，每次1.5h，合並2次提取液，高速離心機2 400r· min-1，離心20min。上清液減壓（yā）濃縮至60mL，加乙醇使其含醇量達百分（fèn）之八十，放（fàng）置過夜，抽濾，沉澱以水溶解並定容（róng）至100mL。精密量取（qǔ）0.15mL，加水（shuǐ）0.85 mL，按標準曲線項下的方法測定吸光度（dù），計算出多糖（táng）含量為1.60％。

2.6.2 超聲方法 精取靈芝粉末3g,加10倍量水 50℃超（chāo）聲提取2次，每次20min，合並提（tí）取液，過濾，濃縮並定容（róng）至100mL，作（zuò）為樣品供試液。精密吸（xī）取 0.15mL,加水0.85mL，按標準曲線項下的方法測定吸光度，計算出靈芝多糖含量為2.57%，較常規方法提高60.61％。

3 討論

3.1 本研究采用正交試驗，根據方差分析和生產實際情（qíng）況確定了靈芝多糖超聲提取好的工藝，即 10倍量水50℃超聲提取2次，每次20min;並且考（kǎo）察了該方法的可行（háng）性和實用性，若確定以靈芝多糖作（zuò）為質量檢測指標時，靈芝多糖的提取可用該方法（fǎ）進行。

3.2 比較了常規提（tí）取和超聲提取（qǔ）靈芝多糖的差（chà）異，結果發現用超聲提取靈芝多（duō）糖具有較大的優勢：提取時間縮短5倍以上，收率提高百分之六十以上；提取全過程無需高溫，避免了因高溫對靈芝多糖（táng）分子結構（gòu）的分解，而常規提取會破壞多糖的分子（zǐ）結（jié）構（gòu）降低多糖的活性；所用儀器（qì）簡單，操作方便，超（chāo）聲波儀自動化程度很高，便於大（dà）規（guī）模生產。 （中國中藥雜誌第30卷第6期）

　　產品型號：JP600G型超聲波提取/乳化機組（zǔ）

　　機型結構：超聲波發生器與提取（qǔ）罐分體式

　　超聲（shēng）頻率：28KHz

　　超（chāo）聲峰值功率：1000W （由原600W升級至1000W，價格不變）

　　提（tí）取罐內尺寸：直（zhí）徑320 ×高250mm

　　提取罐容積：小於等於20L

　　攪拌電機功率：15W

　　攪拌電機轉速：10-30轉/min（可調）

　　電加熱功率：2KW

　　供電電源：220VAC 50HZ 

　　具有數顯時鍾可調功能

　　具有數顯功率可（kě）調功（gōng）能

　　具有數顯（xiǎn）掃頻可調功能

　　具有（yǒu）數顯溫度可（kě）調功能

　　武漢嘉鵬電子有限公（gōng）司專業致力於超聲波提取/萃（cuì）取、超聲波乳化、超聲波清洗、超聲波汙水處理、超聲波（bō）酒類醇化產品的研發、生產及銷售。公（gōng）司擁有（yǒu）多項技（jì）術。其中“數（shù）字式大功率多用途超聲波電源係統”獲武漢市重大科技成果獎。數字掃頻實現了用戶迫切需要的變頻要求的同時還彌補了早期雙頻或多頻技術帶（dài）來（lái）的超聲轉換效率很低的弊端。此項技術經由（yóu）全國各大院校的用戶使（shǐ）用後（hòu）反應很好。應用於植（zhí）物（wù）提取、乳化、汙水處理等領域，院校包括：清（qīng）華大學、北京大學、浙江大學、華中科技大學、武漢大學（xué）、華中師大、中國地質大學、武漢科技大學、上海交大、浙江工業大學、蘭州大學、河南（nán）農業大學、武漢化工學院、吉林大（dà）學、四川大學、華南理工（gōng）大學、華東理工大學、江漢大學、長江大學、中科院（yuàn）武漢（hàn）植物所、昆明植物所（suǒ）、中科院過程所、中科院武漢物理所、武漢市藥檢所等。公司產品行（háng）銷全國除港、澳、台外的所有省份及直轄市。售後方麵：公司產品使用自主技術故性能穩定、質量很好。公司承諾（nuò）5年內免費質保。用戶采用超聲波需注意的（de）事項：超聲波提取方麵：一、被提取物需粉碎到20目或更細。粉碎（suì）越細得率越高。二、選用合適的提取溶劑。三、根據產品的特性和產量合理的安排提取工藝。

　　超聲波（bō）乳化方麵：一、乳化液的配方包括乳化劑的用量。二、乳化時間的選定，並不是時間長就越好，乳化過程是（shì）分散和聚（jù）合不停的循環的過程。按現（xiàn）有試驗結果顯示10－15分鍾（zhōng）的乳化粒徑可達100納米。

　　重要的是數（shù）字掃頻的選擇，此項共有16檔選擇，數值越低則氣泡越粗（cū）、力量越大；數值越高則氣泡越細、力（lì）量越小。不（bú）同（tóng）的提取或乳化物質改變數字掃頻會帶來不同的效果及效率。

　　超聲波提取天然（rán）產物包括超聲波提（tí）取多肽、氨基酸（suān）、核酸、各種酶類、單糖、寡（guǎ）糖、多糖、糖蛋白、樹脂、膠體物、木質素、維生素（sù）、脂肪、油脂、蠟、生物堿（jiǎn）、揮發油、黃酮、糖苷類、苯丙素類、有機酸、酚（fēn）類、醌類、甾體化合物、抗生素類等。