馬尾鬆（sōng）Pinus massoniana Lamb又名青鬆毛、鬆葉、鬆針等，為鬆（sōng）科植物馬（mǎ）尾鬆的（de）針葉。幹燥針葉（yè）作（zuò）為一味常用中（zhōng）藥，始載於《名醫別錄》上品。其（qí）性溫，葉苦、澀，有祛（qū）風止痛、殺蟲止癢、活血消腫、安神、明目等功效，臨床（chuáng）上用於治療風濕疼痛（tòng）、牙（yá）痛、跌打損傷、腳氣水腫、夜（yè）盲症、心腦血管病、糖（táng）尿病、肥胖病、肝病、胃病、淋病、慢性支（zhī）氣（qì）管（guǎn）炎、腫瘤等症（zhèng），其價值日益受到重（chóng）視。馬尾鬆針葉中（zhōng）含黃酮（tóng）類化合物、貝殼核酸-19-甲醚、南洋核（hé）酸等，而（ér）且還有（yǒu）揮發油（主要成分為蒎烯及（jí）乙酸龍腦酯）和胡蘿卜素、維生素B、C維生素（sù）、K維生素、E維生素等。

　　有（yǒu）文獻報道馬尾（wěi）鬆中總黃酮的提取（qǔ）方法采用乙醇提取，但是，這種方法的提取效率（lǜ）仍然較低。近年來，超聲技術應用於提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質、動物（wù）組（zǔ）織漿的毒質（zhì）等研（yán）究已有報道，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很（hěn）多研究表（biǎo）明（míng），利用超聲波產生的強烈振動（dòng）、高（gāo）的加速（sù）度、強烈（liè）的（de）空化效應、攪拌作（zuò）用等，可加速植物材料中的有效成分（fèn）進入溶劑，從而增加有效成分的提取（qǔ）率，縮（suō）短提取時間（jiān），並（bìng）且還可避（bì）免高溫對提取成分的影（yǐng）響。但超聲技術應用於提取馬尾鬆中（zhōng）黃酮類物質的研究（jiū）尚（shàng）未見（jiàn）報道，本文報道（dào）用超聲波提取馬尾鬆總（zǒng）黃酮及鑒別。

1 儀器與試劑（jì）

1.1 儀器 JP600G型超聲波提取罐（武（wǔ）漢嘉鵬電子有限公司）；UV-755B紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠（chǎng））；ZF-Ⅰ型三用紫外分（fèn）析（xī）儀（上海顧村光電儀器廠）SHB-Ⅲ循環水式（shì）多用真空泵（鄭州長（zhǎng）城科工貿有限公司）。

1.2　試（shì）劑　95%乙醇AR;亞硝（xiāo）酸鈉AR;硝酸鋁（lǚ）AR;氫氧化鈉 AR;三氯化（huà）鋁AR；鹽酸AR；氨水AR;冰（bīng）醋酸AR;醋酸乙酯AR; 蘆丁標準品（中（zhōng）國藥品生物製品檢定所）；新鮮馬尾鬆采自廣西百色（sè）市郊區。

2　方法與結果

2.1　總黃酮成分提取　取新鮮馬尾鬆，烘幹，粉碎。稱取（qǔ）馬尾（wěi）鬆粉末約6g，加80 ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣（zhā）再加80 ml 95％乙醇（chún），超聲波提取2.5 h，抽濾，合並兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩（shèng）5～7 ml為止，放置100 ml容量瓶中，用 60%乙醇（chún）稀釋至刻度，得樣品液。

2.2　測定方法依據　以蘆丁為（wéi）對照品測定馬尾鬆中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時（shí）控製適宜pH值，使黃（huáng）酮化合物與鋁鹽形成絡合物，在可見光區能獲得穩定的特征吸收峰。

2.3　定量實（shí）驗-總黃酮的含量測定

2.3.1　波長的選擇　取樣品液適量，在0.30 ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下（xià），經硝酸鋁顯色（sè）後，以試劑為空白參（cān）比液在 420～700 nm波長範圍測定絡合物的（de）吸（xī）光度，絡合物於510 nm波長處有好的吸收，故測定（dìng）時選用此波長。 2.3.2　標準曲線的繪製　分別精密吸取蘆丁對照液（yè）（0.13 mg/ ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml於10.00 ml容量瓶中，分別加（jiā）入5%亞硝酸鈉溶液（yè）0.30 ml，搖勻，靜置6 min;再加 10%硝酸鋁溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min;再（zài）加4%氫氧化鈉（nà）溶液4.00 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min，以試劑作空白參比液，於510 nm處測定吸光度，見表1。

根據上表（biǎo）得回歸方（fāng）程：A＝3.619×103+12.34 C，r=0.9999。

2.3.3　提取物含量的（de）測定　精密（mì）吸取樣品液0.50 ml,置10.00 ml容量瓶，按標準曲線的製備方法測（cè）定其吸光度A=0.496，根據（jù）回歸方程：A=3.619×10-3±12.34C，計算樣品中總黃酮的含量C ＝0.755 8 mg/ml。

2.3.4　回收率實驗　精密（mì）量取樣品液1.00ml，加入標準蘆丁對照（zhào）品1.00 ml（0.13 mg/ml），同前樣品測定（dìng）方法操作測定吸光度，求出回收率（lǜ）為101％。

表1　紫外（wài）可見分光光度計測定吸光度

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C/mg·ml-1 　吸光度

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0.000 0.000

0.006 0.085

0.013 0.157

0.026 0.329

0.039 0.488

0.052 0.648

0.065 0.801

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2.4　定性實驗（yàn）-總黃酮的鑒別

2.4.1　頗色反應

紫外光下呈色反應：取該（gāi）樣品溶液點在濾紙（zhǐ）上，在（zài）可見光下呈（chéng）灰黃色，在紫外光下呈灰褐色並有熒光斑點。

濃氨水反應（yīng）：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏（xūn）0.5 min，立即在紫外光下觀察，呈很明顯的黃褐色熒光斑點（diǎn）。

三氯化鋁反應：取樣品溶（róng）液點在濾紙上（shàng），滴加1%三氯化鋁乙（yǐ）醇溶液（yè），吹幹。在可見光下呈灰黃（huáng）色，在紫（zǐ）外光下（xià）呈黃色熒光斑（bān）點。

乙酸鎂反應：取樣品溶液點在（zài）濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹幹，紫外光下呈黃色斑（bān）點。

鹽酸（suān）-鎂粉反應：取乙醇提取液1ml於試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數（shù）滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。 2.4.2　紙層析　取樣（yàng）品溶液10μl點在濾紙上。用正丁醇：醋酸：水=4:1:5（體積比）為展開劑，上（shàng）行展開5 h,取出晾幹。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹幹後於紫外光下，可見熒光斑點。

3　討論

　　實驗結果（guǒ）表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為（wéi）101%，本實驗所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃（huáng）酮類物質其純度較高（gāo）。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、節能的目的（de），此方法采用全（quán）物理過（guò）程，無任何（hé）汙染，是一（yī）條理想的提取黃酮類物質的途徑，具有廣闊的應用前景。

　　黃酮類化合物是一（yī）大類天然產物，廣泛存在於植物界，是許多中（zhōng）草藥的有效成分。在自然（rán）界中很（hěn）常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙（shuāng）氫黃（huáng）（醇）、異黃酮、雙黃（huáng）酮、黃烷醇（chún）、查爾酮、橙酮、花色苷（gān）及新黃酮類等。天然來源的生物黃酮（tóng）分子量小，能被人體（tǐ）迅速吸收，能通過血腦屏（píng）障，進入脂肪組織，進而體現出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動（dòng）脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循（xún）環、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大（dà）腦及其他髒器細（xì）胞的功能。

　　黃酮類化合（hé）物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管（guǎn）疾病、抗炎鎮痛、免疫調節、降血（xuè）糖、治療骨質疏鬆、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用（yòng）。近年來（lái），世界上掀起了植（zhí）物藥開發（fā）的熱（rè）潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。馬尾鬆分布廣（guǎng）泛（fàn），本實驗結果（guǒ）表明（míng）馬尾鬆中（zhōng）含有較為（wéi）豐富的黃酮。因此，馬（mǎ）尾鬆具有廣泛開發（fā）和利用價值，值得綜合利用並加強（qiáng）資源開發。

　　產品型號：JP600G型（xíng）超聲波提取/乳化機組（zǔ）

　　機型結構：超聲波發生器與提取（qǔ）罐分體式

　　超聲（shēng）頻率：28KHz

　　超聲峰值功率：1000W （由原（yuán）600W升（shēng）級至1000W，價格不變）

　　提取罐內尺寸：直徑320 ×高250mm

　　提取罐容積（jī）：小於等於20L

　　攪拌（bàn）電（diàn）機功率：15W

　　攪拌電機轉速：10-30轉/min（可（kě）調）

　　電加熱功率：2KW

　　供電電源：220VAC 50HZ 

　　具有數顯時鍾可（kě）調功（gōng）能

　　具有數顯功率可調功能

　　具（jù）有數顯（xiǎn）掃頻可（kě）調（diào）功能

　　具有數顯溫度可（kě）調功能

　　武漢嘉（jiā）鵬電子有限公司專業致力於超聲波提取/萃取、超聲波乳化、超（chāo）聲波清洗、超聲波（bō）汙水處理、超聲波（bō）酒類（lèi）醇化產品的研發、生產及銷售。公司擁有多項（xiàng）技術。其中“數字（zì）式大功率多用途超聲波電源係統”獲武漢市重大科技成果獎。數字掃頻實（shí）現（xiàn）了（le）用戶迫切需要（yào）的變頻要求的同時還彌補了早期雙頻（pín）或多頻技術帶來的超聲轉換效率（lǜ）很（hěn）低的弊端。此項技術經由全國各大（dà）院校的用戶使用後反應很好。應用於植物提取、乳化、汙水處理（lǐ）等（děng）領域，院校包括：清華（huá）大學、北京大學、浙（zhè）江大學（xué）、華（huá）中（zhōng）科（kē）技大學、武漢大學、華中師大、中（zhōng）國地質大學、武漢科技大學、上海交大、浙江工業大（dà）學、蘭州大學、河南農業大學、武漢化工學院、吉林大學、四（sì）川（chuān）大學、華（huá）南理（lǐ）工大學、華（huá）東理（lǐ）工大學、江漢大學（xué）、長（zhǎng）江大學、中科院武漢植物所、昆明植物所（suǒ）、中科院過程（chéng）所、中科院武漢物理所、武漢（hàn）市藥檢所等。公司產品行銷（xiāo）全（quán）國除港、澳、台外的所有省份及（jí）直轄市。售後方麵：公司產品（pǐn）使用自主專利（lì）技術故性能穩定、質（zhì）量很好。公司承諾5年內免費質保。用戶采用超聲（shēng）波需注意的（de）事項：超聲波提取方（fāng）麵：一、被提取物需粉碎到20目（mù）或更細。粉碎（suì）越細得率越（yuè）高。二、選用合適的提取溶劑。三、根據產品（pǐn）的（de）特性和產量合理（lǐ）的安排提（tí）取工藝（yì）。

　　超聲波（bō）乳化方（fāng）麵：一、乳化液的（de）配方包括乳化劑的用量。二、乳化時間的選定，並不是時間長就越好，乳化過程是分散和聚合不停的循環（huán）的過程。按現有（yǒu）試驗（yàn）結果顯示（shì）10－15分鍾的乳化粒徑可達100納米（mǐ）。

　　重要的是數（shù）字掃頻的（de）選擇，此項共有16檔選擇，數（shù）值越低（dī）則氣泡（pào）越粗、力量（liàng）越大；數值越高則氣泡越細、力量越小。不同的（de）提取或乳化物質改變數字掃頻會帶來不同的效果及（jí）效率。

　　超聲波提取天然（rán）產物包括（kuò）超（chāo）聲波提取多肽、氨（ān）基酸、核（hé）酸、各種酶類、單糖、寡糖、多（duō）糖、糖蛋白、樹（shù）脂、膠體物、木質素、維生素、脂肪、油脂、蠟（là）、生物堿、揮發油、黃酮、糖（táng）苷類、苯丙（bǐng）素類、有機酸、酚類、醌類、甾體化合物、抗生素類等。