斑蝥是（shì）我國中藥中很早被發現有抗癌作用的藥物，其活性成分為斑蝥素，它對多種癌細（xì）胞有較強的抑製和（hé）破壞作用。有人用低濃度氫氧化鈉溶液煎煮處理提（tí）取斑蝥素獲得（dé）成功，亦可用超聲（shēng）波提取斑（bān）蝥素。本實驗確（què）定了超（chāo）聲波（bō）提取斑蝥素的好的工藝，現報道如下。

　　1 材料

　　JP600G型超聲波提取罐(武漢嘉鵬電子有限公司);島津GC-14B,C-R7A氣相色譜儀（yí）(日本島津公司（sī）)。斑蝥(經廣州中藥大學鑒定為南方（fāng）大斑蝥（móu）);斑蝥素(廣東省藥檢所);氫氧化鈉、丙酮（tóng）為分析純;其餘均為色譜純。

　　2 方法

　　2.1 含量測定

　　2.1.1 色譜（pǔ）條件 CBP-1(25cm×0.25mm, 5μm)色譜柱，氫火焰離子化檢測器，氮氣(20 mL· min-1，130 KPa)，氫氣(65 KPa)，AIR(65 KPa)，柱溫：170℃，進（jìn）樣口溫度：210℃，檢測器（qì）溫度：250℃。

　　2.1.2 對照品溶液配製 精密稱取斑蝥素對照品（pǐn） 6mg於5mL量（liàng）瓶中（zhōng）加丙酮至（zhì）刻（kè）度，得濃（nóng）度為1.2g· L-1的對照品（pǐn）溶液。

　　2.1.3 供（gòng）試品溶液製備（bèi） 精密吸取斑蝥素提取液 10mL,鹽酸調至PH2，氯仿萃取3次(20，15，15mL) 合並氯仿液，水浴蒸幹，殘渣丙酮溶解，轉移至1mL量瓶（píng），加丙酮至刻度，即得。

　　2.1.4 含量測定 取對（duì）照品溶液0.8μL,供試液 2μL,進行氣相色譜分析，外標法計（jì）算含量(斑蝥素保留時間約5.85min)。

　　2.2　超（chāo）聲波提取工（gōng）藝（yì）　以斑（bān）蝥素含量為指標，采用正交（jiāo）設計法（fǎ），選擇L4(32)正交試驗表（biǎo），考察（chá）氫氧化鈉濃度、超聲波功率、超聲時間對斑（bān）蝥素含（hán）量的影響，優選好的提取工藝。因素與水平見表1，正交設計見表2。提取操作為：稱取斑蝥2g,加入10倍量125mmol· L-1氫氧化鈉溶液，按正（zhèng）交（jiāo）試驗表中條件提取，提取（qǔ）液濾過，合並濾液（yè），以3000r·min-1離心10min,上清（qīng）液水浴濃縮至 20mL。照（zhào）含量測（cè）定方法測定含量，以含量（liàng）高（gāo）者為滿分10分，餘按下式計算：本次試驗得分=本次試驗含量÷最高含（hán）量×10。表1　試驗因素水平表 Tab 1 Level of experimental factors

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　　因素

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　　水平 氫氧化鈉濃度/mmol·-1 超（chāo）聲功率 超聲時間/min-1

　　A B C

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　　1 0.250 800 25,15

　　2 0.125 600 35,15

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　　表2 正交試驗數據（jù）表 Tab 2 Data of orthogonal experiment

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　　因素考察指標

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　　試驗號 氫氧化鈉濃度 超聲功率 超聲時間 斑蝥素（sù）含量

　　A B C /mg·g-1 得分

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　　1 1 1 1 0.084 1.7

　　2 2 1 2 0.044 0.9

　　3 1 2 2 0.175 3.6

　　4 2 2 1 0.486 10

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　　I1 5.3 2.6 11.7

　　I2 10.9 13.6 4.5

　　I1 2.7 1.3 5.8

　　I2 5.5 6.8 2.3

　　R 2.8 5.5 2.5

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　　2.3　工藝驗證　按（àn）2.2所得好的工藝（yì）提取（qǔ）3批次斑蝥，分別（bié）測定含量。另取同批次（cì）斑蝥2g,在10倍量 125mmol·L-1氫氧化鈉溶液中浸泡30min，加熱至 100℃提取60min,濾過，殘渣再用同（tóng）法提取60min,濾過，合並濾液，以3000r·min-1離心10min，上清液水浴濃縮至20mL,共做3份，照含量測定方法（fǎ）測定含量。比較兩種（zhǒng）方法所得斑蝥素得率煎（jiān）煮法為1.14, 1.04,1.08，平均為1.09;超聲法為（wéi）1.16，1.04，1.10平均為1.10，P>0.05。

　　3 結果

　　由表2R值可知RB>RA≈RC，影響（xiǎng）因素大小順序為B>A≈C，功（gōng）率是影響斑（bān）蝥素含量的重（chóng）要因素。因IA2>IA1，IB2>IB1>， IC1>IC2，確定好的工（gōng）藝為A2B2C1，即用125mmol·L-1氫氧化鈉，功率 600kHz超聲提取2次(25，15min)。該40min超聲提取工（gōng）藝與120min煎煮效果相當。

　　4　討論

　　煎煮法所需時間長，加之斑蝥體內脂肪等有機物在氫氧化鈉作（zuò）用下，加熱後（hòu）產生強烈（liè）惡臭，煎煮液十分粘稠，濾過困難（nán）。用超聲代替煎煮提取斑蝥素克服了上述不足。

　　超聲波輻射可以導致生物體係發生各種生物（wù）效應，其物理機製包括3個方麵：熱學（xué）機製、力學(機械)機製和空化機製，空化機製包括穩態（tài）空化和瞬態空化（huà）兩個（gè）方麵。一般認為，在藥物提取（qǔ）過程（chéng）中起主要作（zuò）用的是（shì）空化機製。功率較低時容易穩態空（kōng）化，液體中氣泡並（bìng）不破裂（liè），而是進入體共振(脈動)狀態，在其周圍產生微聲流，微聲流的粘滯（zhì）應（yīng）力及氣泡（pào）高頻脈動本身產生的剪切力會破壞細胞。進一步（bù）提高聲強時，則發生瞬態空化，氣泡在負壓相迅速膨脹，隨（suí）即（jí）又在正壓相急速收縮以至（zhì）崩潰，其（qí）瞬（shùn）時溫度可達數千度（dù），並常伴有（yǒu）發光，衝擊波及（jí）高速射流等現象，藥材細胞會被破壞。因此，理論上，功率的提高及超聲時間的延長對藥（yào）材細胞破壞有利(從而有效成分溶出更（gèng）充分)，但雜質（zhì）的溶出亦（yì）大大增加，不利於後續處理，甚至有可能誘發（fā）化學（xué）反應，降低有效成分的得率，本實驗所得好的工藝中，亦印證了這一點。 (中國醫院藥學雜誌第25卷第3期)

　　產品型號：JP600G型超聲波提取/乳化機組

　　機型結構：超（chāo）聲波發（fā）生器與提取罐分體式

　　超聲頻率：28KHz

　　超聲峰值功率：1000W (由原600W升級至1000W，價格不變)

　　提取罐內尺寸：直徑320 ×高250mm

　　提取罐容積：小於等於20L

　　攪拌電機（jī）功率：15W

　　攪拌電機轉速：10-30轉/min(可（kě）調)

　　電加熱功率：2KW

　　供電電源（yuán）：220VAC 50HZ

　　具有數顯時鍾可調功能

　　具（jù）有數顯功率可調功能

　　具有數顯掃頻可調功能

　　具有數顯溫度（dù）可調功能

　　武漢（hàn）嘉（jiā）鵬（péng）電子有限公司專業致力於超聲波（bō）提（tí）取/萃取、超聲波乳化、超聲波清（qīng）洗、超聲波（bō）汙（wū）水處理、超聲波酒類醇化產品的研發、生產及銷售。公（gōng）司擁（yōng）有多（duō）項技術。其中“數字式大功率多用途（tú）超聲波電源係統”獲武漢市重大科技成果獎。數字掃頻實現了用戶迫（pò）切需要的變頻要求的同時還彌補（bǔ）了早期雙（shuāng）頻或多頻技術帶（dài）來的超（chāo）聲轉換效率很低（dī）的弊端。此項技術經由全國（guó）各大院校的（de）用戶使用後反應很好。應（yīng）用（yòng）於植物提取（qǔ）、乳化（huà）、汙水（shuǐ）處理等領域，院校包括：清華大學、北（běi）京大學、浙江大（dà）學、華中科技大學、武漢大學、華中師大、中國地（dì）質大學、武漢科技大學、上海交大、浙江工業大學、蘭州大學、河南（nán）農業大學（xué）、武漢化工學院、吉林大學（xué）、四（sì）川大學（xué）、華南（nán）理工大學、華東理工大（dà）學、江漢大學、長江大學（xué）、中科院武漢（hàn）植物所（suǒ）、昆明植物（wù）所、中科院過程所、中科院武漢物理所、武漢（hàn）市藥檢所等。公司產品（pǐn）行銷全（quán）國除港、澳、台外的所有省份及直轄市。售後方麵：公司產品使用自主技術故性能穩定、質量很好。公司承諾5年內免費質保。用戶采用超聲波需注意的事項：超聲波提取方麵：一、被提取物（wù）需粉碎到20目或更細。粉碎越細得率越高。二、選用合（hé）適的提取溶劑。三、根據產品的（de）特性和產量合理的安排提取工藝。

　　超聲波乳化方麵：一、乳化液的配（pèi）方包括乳化劑的用量。二、乳化時（shí）間的選定，並不（bú）是時間長就越好，乳化過（guò）程是分散和聚（jù）合不停的循環的過程。按現有試驗結（jié）果顯（xiǎn）示10-15分鍾的乳化粒徑可（kě）達100納米。

　　重要的是數字掃頻的（de）選擇，此項共有16檔選擇，數值越低則（zé）氣泡越粗、力量越（yuè）大（dà）;數（shù）值越高則氣泡越細（xì）、力量越小（xiǎo）。不同的提取或乳化物質改變數字掃頻（pín）會帶來不同的效果及（jí）效率。

　　超聲波提取（qǔ）天然（rán）產物包括超聲波提（tí）取多肽、氨基酸、核酸、各種酶類、單糖、寡糖、多糖、糖蛋白、樹脂、膠體物、木（mù）質素（sù）、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物（wù）堿、揮發油、黃酮、糖苷類、苯丙素類、有機酸、酚類、醌類、甾體化合（hé）物、抗生素類等。